游居敬字行简，号可斋，南平人。生于明正德四年(1509年)。14岁入府学。嘉靖十一年(1532年)中进士，选入翰林院庶常馆为庶吉士，升任监察御史、两京刑部右侍郎。
居敬为官廉洁，执法严明，不徇私情。任监察御史，巡视卢沟桥，检查商人匿税，严词指责户部尚书失职行为。巡视应天府(今南京)，弹劾伪学，抓捕奸党，平反冤狱，释放久滞监狱的民众。巡视池州，发现某太守倚仗其父是当朝宰相，狂妄恣肆，扰乱乡民，便按律处之。转任浙江按察司佥事时，大胆纠正官场恶俗，予民便利，杭州风俗为之一变。在浙江三年间，节约许多经费。嘉靖二十年(1541年)转任广东按察副使。嘉靖二十六年(1547年)任湖广参政，升左、右布政使。
明末，东南沿海倭寇猖獗，朝廷调动大军征剿。因开支太大，国库军饷不足，居敬便解散地方兵，组织边境群众，抵抗倭寇。地方兵闻讯，聚集关隘闹事，督府束手无策。居敬亲自前往向解释，使风波平息。后担任右副都御史，被派往云南巡察。云南镇守宦官沐朝弼，倚仗阉党权势，侵犯民田，独霸一方，居敬依法裁夺其权利，追回被其无理侵占的钱财。沐朝弼到巡方御史王大任(宦官)处搬弄是非，诬陷居敬擅自用兵，居敬被捕入京，杖刑后发配碣石卫充军。
隆庆元年(1567年)，穆宗即位，居敬获赦，回朝起用。隆庆三年(1569年)，任两京刑部右侍郎。后受宰相高拱刁难，于隆庆五年(1571年)五月，辞官归故里。同年九月初十日去世，钦赐祭葬于南山(今南平大凤镇南山村)
居敬居官至二品，平生生活俭朴，粗衣淡饭，一张草席用了10年。他不受贿，不徇私情，历官40载，没有留下家产。著有《五经旁注》、《可斋文集》、《丹园集》、《延郡志》、《奏议》传世。